Доставка невирусной ДНК, специфичной для Т-клеток, и создание CAR-T-клеток in vivo с использованием целевых липидных наночастиц.

Предыстория

Терапия с использованием химерных антигенных рецепторов (CAR) ex vivo произвела революцию в лечении рака. Однако доступность лечения ограничена высокой стоимостью, длительными сроками производства, а также необходимостью в специализированных центрах и стационарном лечении. Стратегии создания CAR-T-клеток in vivo стали многообещающей альтернативой, которая может решить проблемы, связанные с производством CAR-T-клеток. Большинство современных подходов к созданию CAR-T-клеток in vivo, несмотря на обнадеживающую доклиническую эффективность, основаны на временной доставке матричной РНК (мРНК) или вирусных векторах, которые имеют ограничения с точки зрения эффективности, долговечности и масштабируемости. Чтобы решить эти проблемы, были разработаны новые таргетные липидные наночастицы (ЛНЧ) на основе ДНК, которые мы назвали NCtx.

Методы 

Миникольцевая ДНК (мкДНК), кодирующая конструкцию CAR, и мРНК транспозазы SB100x были инкапсулированы в новую липидную форму, функционализированную Т-клеточными анти-CD7 и анти-CD3-связывающими белками. В лабораторных условиях оценили специфичность Т-клеток, эффективность трансфекции мкДНК и мРНК, интеграцию CAR с помощью транспозона и функциональность полученных CAR-T-клеток. Эффективность in vivo оценивалась на моделях В-клеточного лейкоза с гуманизированными мышиными ксенотрансплантатами из мононуклеарных клеток периферической крови и CD34+ стволовых клеток.

Результаты 

В лабораторных условиях NCtx продемонстрировал высокую специфичность и эффективность трансфекции как с помощью мтДНК, так и с помощью мРНК в первичных Т-клетках. Транспозазная мРНК способствовала геномной интеграции гена CAR, что привело к образованию стабильных CAR-T-клеток, которые демонстрировали антиген-специфическую цитотоксичность и высвобождение цитокинов. В естественных условиях однократное внутривенное введение NCtx привело к образованию большого количества CAR-T-клеток, что обеспечило эффективный контроль над опухолью и значительно повысило выживаемость в двух различных моделях ксенотрансплантатов. NCtx представляет собой новый невирусный генотерапевтический вектор для CAR-T терапии in vivo, предлагающий масштабируемую и потенциально более доступную альтернативу традиционным подходам к генерации CAR-T клеток.

Ref: https://doi.org/10.1136/jitc-2025-011759