71220019 Набор LymphoTrack® IGK Assay Panel - MiSeq®

Локус гена легкой цепи каппа иммуноглобулина (IGK) человека на хромосоме 2 (2p11.2) включает множество различных сегментов генов Vϰ, объединенных в семь семейств генов Vϰ, а также пять сегментов генов Jκ, расположенных выше по течению от области Cϰ. Делеционный элемент kappa (Kde), расположенный примерно в 24 кб ниже по течению от области Jϰ-Cϰ, может перестраиваться в сегменты генов Vϰ (Vϰ-Kde), а также в изолированный RSS в интроне Jϰ-Cϰ (INTR). Возникающие при этом перестройки Vϰ-Kde и INTR-Kde являются продуктом неудачных перестроек, сохранившихся в В-клетке.
Лимфоидные клетки отличаются от других соматических клеток организма. В процессе развития гены антигенных рецепторов лимфоидных клеток подвергаются соматической генной перестройке.
Например, в процессе развития В-клеток гены, кодирующие локус IGK, собираются из множества полиморфных генных сегментов, которые подвергаются перестройкам и отбору, в результате чего образуются комбинации, уникальные как по длине, так и по последовательности. Поскольку лейкозы и лимфомы возникают в результате злокачественной трансформации отдельных лимфоидных клеток, все лейкозы и лимфомы, как правило, имеют одну или несколько клеточно-специфических или "клональных" перестроек генов антигенного рецептора. Поэтому тесты, выявляющие клональные перестройки IGK, могут быть полезны при изучении В-клеточных злокачественных опухолей. Первоначально клональные перестройки выявлялись с помощью методов рестрикционной фрагментации и саузерн-блот гибридизации (RF-SBH). Однако эти тесты оказались громоздкими, трудоемкими, требовали больших объемов ДНК и не подходили для анализа многих менее разнообразных локусов антигенных рецепторов. В последние несколько десятилетий на смену RF-SBH анализам пришли ПЦР-тесты на определение клональности, разработанные Александром Морли и считающиеся в настоящее время золотым стандартом. ПЦР-тесты определяют клональность на основе избыточного представительства амплифицированных продуктов V-J или D-J после их разделения с помощью геля или капиллярного электрофореза.
Несмотря на свою чувствительность и пригодность для исследования небольших количеств ДНК, эти тесты не позволяют легко отличить клональные популяции от множества перестроек, которые могут скрываться под пиком одного размера, а также не предназначены для определения специфической последовательности V-J ДНК, необходимой для отслеживания клональных популяций в последующих анализах. Это второе ограничение может иметь особое значение, поскольку после идентификации уникальной клон-специфической последовательности ДНК эта последовательность может быть использована в последующих анализах для отслеживания и сопровождения этих клональных популяций клеток. Данный анализ LymphoTrack IGK Assay - MiSeq представляет собой значительное усовершенствование по сравнению с существующими анализами клональности, использующими фрагментный анализ, поскольку он эффективно выявляет большинство перестроек генов IGK с помощью одной мультиплексной мастер-смеси и одновременно идентифицирует последовательность ДНК, специфичную для каждой клональной перестройки гена. Таким образом, этот анализ имеет два важных и взаимодополняющих назначения: он помогает обнаружить начальные клональные популяции и идентифицирует информацию о последовательности, необходимую для отслеживания этих клонов в последующих образцах. Наша единая мультиплексная мастер-смесь для IGK нацелена на перестройки генов Vϰ- Jϰ, Vϰ-Kde и INTR-Kde, описанные в лимфоидных злокачественных опухолях. Праймеры, входящие в состав мастер-миксов, разработаны с адаптерами Illumina и имеют 24 различных индекса. Данный анализ позволяет проводить одностадийную ПЦР-реакцию и объединять ампликоны из нескольких различных образцов и мишеней (полученных с помощью других анализов LymphoTrack для MiSeq, в комплект не входят) на одной проточной ячейке MiSeq, что позволяет параллельно анализировать до 24 образцов для каждой мишени в одном цикле. Соответствующее программное обеспечение LymphoTrack Software - MiSeq обеспечивает простой и оптимизированный метод анализа и визуализации данных. Положительный и отрицательный контроль клональности входят в комплект. 

Реагенты используются для исследований, и не используются для диагностических анализов.