ИГРА-ТБ — отечественный набор реагентов для качественного иммуноферментного определения интерферона-гамма (ИФН-γ) в плазме крови, выделенной из гепаринизированной цельной крови человека. Тест выявляет Т-клеточный in vitro ответ на антиген, ассоциированный с инфекцией Mycobacterium tuberculosis, и позволяет обнаружить латентную, лёгочную и внелёгочную туберкулёзную инфекцию, а также оценить риск заболевания.
Набор основан на технологии Interferon-Gamma Release Assay (IGRA). Разработан совместно с ООО «ЭЛТЕХ» («Экспертные лабораторные технологии»), серийный выпуск — в ОЭЗ «Дубна». Выпускается в одном варианте исполнения: 50 определений, включая контрольные образцы. Подходит и для ручной постановки, и для автоматических ИФА-анализаторов открытого типа.
Ключевые преимущества
Высокая точность
диагностическая чувствительность и специфичность — 100% (ДИ 95%: 92,89–100%) по данным клинических испытаний
Быстрый результат
анализ занимает от 20 ч 40 мин до 26 ч 40 мин, включая инкубацию 18–24 ч, не требующую присутствия оператора
Удобство
стимуляторы уже нанесены внутрь вакуумных пробирок, инкубация лимфоцитов проходит без дополнительных манипуляций
Стандартное оборудование
ИФН-γ определяется методом рутинного ИФА на обычных планшетных фотометрах; возможна автоматизация на любом открытом ИФА-анализаторе
Меньше невалидных результатов
в сравнительных испытаниях ИГРА-ТБ показал наименьшую долю невалидных и сомнительных результатов — 1%*
Альтернатива кожным пробам
нет субъективной оценки, ложноположительных реакций после вакцинации БЦЖ, риска аллергии и непереносимости туберкулина
Точная интерпретация
результат оценивается по величине интерферонового ответа (ΔИФН) с автоматической интерпретацией в ПО «ИГРА»
Показания к назначению
Скрининг латентной туберкулёзной инфекции (ЛТИ)
- дети до 17 лет включительно, ежегодно проходящие скрининг
- лица, контактировавшие с носителем активного туберкулёза
- медицинские и социальные работники, сотрудники учреждений закрытого типа, ФСИН
- иммигранты из стран с высокой заболеваемостью туберкулёзом
- военнослужащие, сотрудники правоохранительных органов
Перед началом иммуносупрессивной терапии
- биологические препараты (ингибиторы TNF-альфа)
- глюкокортикостероиды
- химиотерапия, лучевая терапия
Пациенты с иммунодефицитными состояниями
- ВИЧ-инфицированные
- после трансплантации органов
- хронические заболевания с высоким риском активации ЛТИ
Альтернатива пробе Манту (ТСТ)
- аллергия на туберкулин или ложноположительная проба Манту (например, после вакцинации БЦЖ)
- необходимость исключить субъективные факторы — ошибки при введении и интерпретации
Дифференциальная диагностика
- подозрение на внелёгочную форму туберкулёза (в комплексной диагностике)
- неясные клинические случаи с затяжным лихорадочным или воспалительным синдромом
Принцип работы
Набор содержит пептидные фрагменты, соответствующие иммунодоминантным Т-клеточным (CD4+, CD8+) эпитопам микобактериальных белков ESAT-6 и CFP-10. У пациента берут по 1 мл крови в три вакуумные пробирки:
- Т-АНТИГЕН — литий-гепарин, разделительный гель и антигенный стимулятор
- ПКО — литий-гепарин, разделительный гель и фитогемагглютинин (положительный контроль стимуляции)
- ОКО — литий-гепарин и разделительный гель (отрицательный контроль стимуляции)
Если в крови есть антиген-специфические лимфоциты, они распознают стимулятор и выделяют ИФН-γ. Пробирки инкубируют 18–24 часа при +37±1 °C, затем центрифугируют для отделения плазмы. Концентрацию ИФН-γ определяют двухстадийным «сэндвич»-ИФА с биотин-стрептавидиновым усилением. Разница концентраций между пробирками «Т-АНТИГЕН» и «ОКО» (ΔИФН) отражает лимфоцитарный интерфероновый ответ на микобактериальные антигены.
Состав набора
| Компонент | Количество |
|---|---|
| Т-АНТИГЕН — пробирки вакуумные для забора 1 мл крови с литий-гепарином, разделительным гелем и антигенным стимулятором | 1 штатив, 50 шт. |
| ПКО — пробирки вакуумные для забора 1 мл крови с литий-гепарином, разделительным гелем и фитогемагглютинином | 1 штатив, 50 шт. |
| ОКО — пробирки вакуумные для забора 1 мл крови с литий-гепарином и разделительным гелем | 1 штатив, 50 шт. |
| Комплект реагентов для ИФА «ГАММА-ИНТЕРФЕРОН-ИФА» — 1 комплект | |
| Р1 Иммуносорбент | 2 планшета по 96 лунок |
| Р2 Контрольный образец (рекомбинантный ИФН-γ человека, лиофилизат) | 4 фл. |
| Р3 Раствор для разведения контрольного образца | 1 фл., 7,0 мл |
| Р4 Конъюгат №1 (биотинилированные моноклональные антитела к ИФН-γ) | 1 фл., 6,0 мл |
| Р5-1 Концентрат конъюгата №2, 11-кратный (стрептавидин, меченный пероксидазой хрена) | 1 фл., 2,5 мл |
| Р5-2 Раствор для разведения конъюгата №2 | 1 фл., 25 мл |
| Р6-1 Хромоген (3,3',5,5'-тетраметилбензидин) | 1 фл., 2,5 мл |
| Р6-2 Раствор для разведения хромогена (цитратный буфер с перекисью водорода) | 1 фл., 25 мл |
| Р7 Концентрат промывочного раствора, 25-кратный | 2 фл. по 50 мл |
| Р8 Стоп-реагент | 1 фл., 25,0 мл |
| Клейкая плёнка для заклеивания иммуносорбента | 8 шт. |
| Одноразовые ванночки для реагентов | 8 шт. |
| Одноразовые сменные наконечники к дозаторам (10–300 мкл) | 64 шт. |
| Инструкция по применению, паспорт | 1 + 1 шт. |
| Трафарет для построения графика | 2 шт. |
Технические характеристики
| Параметр | Значение |
|---|---|
| Метод | ИФА (двухстадийный «сэндвич» с биотин-стрептавидиновым усилением) |
| Аналит | интерферон-гамма (ИФН-γ) |
| Биоматериал | гепаринизированная цельная кровь / плазма |
| Объём крови | 3 мл (по 1 мл в 3 пробирки) |
| Время анализа | 20 ч 40 мин – 26 ч 40 мин |
| Инкубация | 18–24 ч при +37±1 °C, без оператора |
| Центрифугирование | 10 мин при 2800–3000 об/мин |
| ИФА-исследование | ≈2 ч 25 мин |
| Предел количественного определения | 3,125 пг/мл |
| Диагностическая чувствительность | 100% (ДИ 95%: 92,89–100%) |
| Диагностическая специфичность | 100% (ДИ 95%: 92,89–100%) |
| Аналитическая специфичность | 100% |
| Правильность (trueness) | отклонение ≤15% |
| Прецизионность (precision) | CV ≤15% |
| Срок годности | 12 мес. |
| Хранение ИФА-комплекта | +2…+8 °C |
| Хранение вакуумных пробирок | +2…+25 °C |
| Условия эксплуатации | +22±5 °C, влажность ≤80%, давление 84–106,7 кПа |
| Класс потенциального риска | 2б |
| Код ОКПД | 21.20.23.110 |
| Регистрационное удостоверение | № РЗН 2024/21946 от 31.01.2024 |
Интерпретация результатов
Основной показатель — ΔИФН, разница концентраций ИФН-γ между пробирками «Т-АНТИГЕН» и «ОКО», пг/мл.
| ΔИФН, пг/мл | ИФН-γ (ОКО), пг/мл | ОП (Т-АНТИГЕН) / ОП (ОКО) | ОП (ПКО), о.е. | Интерпретация |
|---|---|---|---|---|
| ≤ 8 | ≤ 100 | любой | ≥ 0,5 | Отрицательный, инфекция M. tuberculosis маловероятна |
| 8–9 | ≤ 100 | любой | ≥ 0,5 | «Серая зона», промежуточный результат — рекомендуется повторить анализ |
| ≥ 9 | ≤ 100 | ≥ 1,25 | любой | Положительный, инфекция M. tuberculosis вероятна |
| ≥ 9 | любой | < 1,25 | любой | Невалидный результат — рекомендуется повторить анализ |
| любой | > 100 | любой | любой | Невалидный результат — рекомендуется повторить анализ |
| ≤ 8 | любой | любой | < 0,5 | Невалидный результат — рекомендуется повторить анализ |
Важно: результат качественный — в отношении вероятности наличия или отсутствия инфекции M. tuberculosis. Величина интерферонового ответа не коррелирует с выраженностью инфекции, стадией туберкулёза или иным клиническим показателем.
Сравнение с другими методами диагностики
Тест ИГРА-ТБ участвовал в сравнительных испытаниях, проводимых Московским областным клиническим противотуберкулёзным диспансером, и показал наилучшие результаты среди шести методов иммунологической диагностики инфекции M. tuberculosis.
| Тест | Диаскинтест | Манту | Т-СПОТ.ТБ | TB-Feron | QFT Gold Plus | ИГРА-ТБ |
|---|---|---|---|---|---|---|
| Когорта пациентов с ЛТИ, n=25 | ||||||
| Число невалидных, сомнительных результатов | 2 [8 %] | 1 [4 %] | 3 [12 %] | 0 | 0 | 0 |
| Чувствительность [ДИ 95 %] | 72 %[54,4–89,6 %] | 72 %[54,4–89,6 %] | 80 %[64,3–95,7 %] | 80 %[64,3–95,7 %] | 80 %[64,3–95,7 %] | 80 %[64,3–95,7 %] |
| Объединённая когорта пациентов с ЛТИ и ТОД, n=50 | ||||||
| Число невалидных, сомнительных результатов | 3 [6 %] | 2 [4 %] | 5 [10 %] | 0 | 0 | 0 |
| Чувствительность [ДИ 95 %] | 70 %[57,3–82,7 %] | 74 %[61,8–86,2 %] | 84 %[73,8–94,2 %] | 72 %[59,6–84,4 %] | 72 %[59,6–84,4 %] | 76 %[64,2–87,8 %] |
| Когорта пациентов с низким риском ЛТИ, n=50 | ||||||
| Число невалидных, сомнительных результатов | 2 [2 %] | 20 [40 %] | 12 [24 %] | 0 | 0 | 1 [2 %] |
| Специфичность [ДИ 95 %] | 90 %[81,7–98,3 %] | 32 %[19,1–44,9 %] | 50 %[36,1–63,9 %] | 88 %[79–97 %] | 88 %[79–97 %] | 90 %[81,7–98,3 %] |
| Объединённая группа пациентов с наличием (n=50) и отсутствием (n=50) туберкулёзной инфекции | ||||||
| Число невалидных, сомнительных результатов | 5 % | 22 % | 17 % | 0 | 0 | 1 % |
| Совокупная процентная согласованность результатов теста с клиническим диагнозом [ДИ 95 %] | 80 %[72,2–87,8 %] | 53 %[43,2–62,8 %] | 67 %[57,8–76,2 %] | 78 %[69,9–86,1 %] | 80 %[72,2–87,8 %] | 83 %[75,6–90,4 %] |
* Плеханова М. А., Борисова О. В., Ткачук А. П., Кудряшова А. М., Черепович Б. С., Мануйлов В. А., Гордеев А. А., Смердин С. В. Сравнительное когортное исследование средств иммунологической диагностики туберкулеза: проба Манту, Диаскинтест, T-SPOT.TB, QuantiFERON-TB Gold Plus, STANDARD E TB-Feron, ИГРА-ТБ // Туберкулёз и болезни лёгких. — 2024.
Программное обеспечение «ИГРА»
Для автоматической обработки результатов доступно бесплатное ПО «ИГРА» v1.2.2. Программа:
- принимает данные оптической плотности с планшетного фотометра
- строит калибровочную кривую по контрольным образцам
- рассчитывает концентрацию ИФН-γ в исследуемых образцах
- автоматически интерпретирует результаты для набора «ИГРА-ТБ»
- формирует таблицу результатов и печатные заключения — поимённо и списком
- экспортирует данные в Excel и ЛИС (csv)
Системные требования: Windows 7–11 (32/64 бит), процессор от 1 ГГц, ОЗУ от 2 ГБ, HDD от 1 ГБ, разрешение экрана не менее 1024×768.
Важно: автоматическая интерпретация применима только к данным, полученным с набором «ИГРА-ТБ». Для других IGRA-наборов (QuantiFERON, TB-FERON и др.) возможна обработка без автоматической интерпретации.
Необходимое оборудование и материалы
- термостат суховоздушный 37±2 °C
- шейкер термостатируемый 37±2 °C, 700 об/мин
- вошер для планшетов
- планшетный фотометр двухволновой (450 нм и 620–700 нм)
- центрифуга настольная (1–3)×10³ об/мин
- дозаторы одноканальные 5–1000 мкл
- дозаторы многоканальные 10–300 мкл
- холодильник +2…+8 °C
- дистиллятор
- таймер
- иглы одноразовые к вакуумным системам и держатели
- пробирки типа «Эппендорф» 1,5–2,2 мл
- перчатки, халаты, защитные очки
- дезинфицирующие растворы
Образцы: забор, подготовка, хранение
- Кровь забирают из локтевой вены в три вакуумные пробирки «ИГРА-ТБ» по 1±0,2 мл в ходе одной пункции.
- Пробирки осторожно перемешивают 10 раз, переворачивая вверх дном — не трясти.
- Инкубируют при +37±1 °C в вертикальном положении 18–24 часа. До инкубации пробирки можно хранить до 16 часов при +22±5 °C, не охлаждая.
- После инкубации центрифугируют 10 мин при 2800–3000 об/мин для получения плазмы.
Плазму можно хранить 6 ч при +22±5 °C, 28 суток при +2…+8 °C или 1 год при −18…−20 °C (однократное размораживание). Образцы с выраженным гемолизом, гиперлипидемией или бактериальным проростом не используют.
Проведение ИФА — кратко
- Внести по 100 мкл контрольных образцов (200, 50, 12,5, 3,125 пг/мл и РРО) и исследуемых образцов плазмы в лунки иммуносорбента.
- Внести по 25 мкл конъюгата №1. Инкубировать 90 мин при +37±2 °C и встряхивании 700 об/мин. Промыть 5 раз.
- Внести по 100 мкл рабочего разведения конъюгата №2. Инкубировать 30 мин при +37±2 °C и встряхивании. Промыть 5 раз.
- Внести по 100 мкл индикаторного раствора. Выдержать 25 мин при +22±5 °C в защищённом от света месте.
- Внести по 100 мкл стоп-реагента.
- Измерить оптическую плотность при 450 нм относительно 620–700 нм.
Критерии валидности анализа: ОП нулевого контроля (РРО) — не выше 0,15 о.е.; ОП контрольного образца 200 пг/мл — не ниже 0,8 о.е.
Хранение, транспортировка, утилизация
- ИФА-комплект — +2…+8 °C в течение всего срока годности (12 мес.).
- Вакуумные пробирки — +2…+25 °C в течение всего срока годности. Допускается совместное хранение в холодильнике, но перед использованием пробирки прогревают при +22±5 °C не менее часа.
- Транспортирование — всеми видами крытого транспорта при температуре хранения; допускается +25 °C не более суток. Замораживание не допускается.
- После вскрытия — 3 мес. при +2…+8 °C для стрипов иммуносорбента, конъюгатов, РРО, стоп-реагента, хромогена и растворов для разведения. Восстановленный контрольный образец и его разведения хранению не подлежат.
- Приготовленный промывочный раствор — 15 дней при +22±5 °C или 30 дней при +2…+8 °C; рабочее разведение конъюгата №2 — не более 3 ч при +22±5 °C; индикаторный раствор хранению не подлежит.
Утилизация
- промывные растворы, неиспользованные концентрат промывочного раствора (Р7) и раствор для разведения хромогена (Р6-2) — отходы класса А
- твёрдые отходы, неиспользованные контрольные образцы, конъюгаты, растворы для разведения, иммуносорбент — отходы класса Б
- неиспользованный стоп-реагент — отходы класса Г
- утилизация — специализированными организациями, имеющими лицензию
Меры предосторожности
- Набор предназначен только для профессионального использования в клинико-диагностических лабораториях.
- С образцами крови работают как с потенциально инфекционно-опасным материалом.
- Обязательны средства индивидуальной защиты: перчатки, халат, защитные очки, респиратор.
- Не пипетировать растворы ртом. Запрещены приём пищи, курение и использование косметики в рабочих помещениях.
- Промывные растворы и твёрдые отходы обеззараживают и утилизируют по СанПиН 2.1.3684-21.
- Стоп-реагент содержит серную кислоту — избегать контакта с кожей и слизистыми.
- Набор не применяют при нарушении условий транспортирования и хранения, несоответствии внешнего вида реагентов, нарушении упаковки и по истечении срока годности.
- Противопоказаний и побочных эффектов при работе с набором не выявлено.
Статьи
- Гордеев А. А., Плеханова М. А., Смердин С. В., Ткачук А. П., Мануйлов В. А., Кудряшова А. М., Черепович Б. С., Борисова О. В. Сравнительное исследование шести иммунологических тестов для диагностики туберкулеза у различных групп пациентов // Туберкулез и болезни легких. — 2025. — Т. 103, № 3. — С. 94–102. doi.org/10.58838/2075-1230-2025-103-3-94-102
- Смердин С. В., Гордеев А. А., Плеханова М. А., Вершинина М. В., Ткачук А. П., Мануйлов В. А., Кудряшова А. М., Черепович Б. С., Борисова О. В. Современная иммунодиагностика туберкулезной инфекции у взрослых // Пульмонология. — 2025. — Т. 35, № 4. — С. 530–538. doi.org/10.18093/0869-0189-2025-35-4-530-538
Документы
- Регистрационное удостоверение РЗН 2024/21946 с приложениемPDF, 513 КБ
- Инструкция по применению набора реагентов «ИГРА-ТБ»PDF, 432 КБ
- Брошюра «Тесты ИГРА-ТБ» · Е-ЛАБPDF, 1,5 МБ
- Руководство пользователя ПО «ИГРА» v1.2.2PDF, 1,5 МБ
Бесплатное ПО «ИГРА» для оценки результатов предоставляется по запросу — напишите менеджеру через форму «Запросить КП».