ИГРА-ТБ — отечественный набор реагентов для качественного иммуноферментного определения интерферона-гамма (ИФН-γ) в плазме крови, выделенной из гепаринизированной цельной крови человека. Тест выявляет Т-клеточный in vitro ответ на антиген, ассоциированный с инфекцией Mycobacterium tuberculosis, и позволяет обнаружить латентную, лёгочную и внелёгочную туберкулёзную инфекцию, а также оценить риск заболевания.
Набор основан на технологии Interferon-Gamma Release Assay (IGRA). Разработан совместно с ООО «ЭЛТЕХ» («Экспертные лабораторные технологии»), серийный выпуск — в ОЭЗ «Дубна». Выпускается в одном варианте исполнения: 50 определений, включая контрольные образцы. Подходит и для ручной постановки, и для автоматических ИФА-анализаторов открытого типа.
Ключевые преимущества
Высокая точность
диагностическая чувствительность и специфичность — 100% (ДИ 95%: 92,89–100%) по данным клинических испытаний
Быстрый результат
анализ занимает от 20 ч 40 мин до 26 ч 40 мин, включая инкубацию 18–24 ч, не требующую присутствия оператора
Удобство
стимуляторы уже нанесены внутрь вакуумных пробирок, инкубация лимфоцитов проходит без дополнительных манипуляций
Стандартное оборудование
ИФН-γ определяется методом рутинного ИФА на обычных планшетных фотометрах; возможна автоматизация на любом открытом ИФА-анализаторе
Меньше невалидных результатов
в сравнительных испытаниях ИГРА-ТБ показал наименьшую долю невалидных и сомнительных результатов — 1%
Альтернатива кожным пробам
нет субъективной оценки, ложноположительных реакций после вакцинации БЦЖ, риска аллергии и непереносимости туберкулина
Точная интерпретация
результат оценивается по величине интерферонового ответа (ΔИФН) с автоматической интерпретацией в ПО «ИГРА»
Показания к назначению
Скрининг латентной туберкулёзной инфекции (ЛТИ)
- дети до 17 лет включительно, ежегодно проходящие скрининг
- лица, контактировавшие с носителем активного туберкулёза
- медицинские и социальные работники, сотрудники учреждений закрытого типа, ФСИН
- иммигранты из стран с высокой заболеваемостью туберкулёзом
- военнослужащие, сотрудники правоохранительных органов
Перед началом иммуносупрессивной терапии
- биологические препараты (ингибиторы TNF-альфа)
- глюкокортикостероиды
- химиотерапия, лучевая терапия
Пациенты с иммунодефицитными состояниями
- ВИЧ-инфицированные
- после трансплантации органов
- хронические заболевания с высоким риском активации ЛТИ
Альтернатива пробе Манту (ТСТ)
- аллергия на туберкулин или ложноположительная проба Манту (например, после вакцинации БЦЖ)
- необходимость исключить субъективные факторы — ошибки при введении и интерпретации
Дифференциальная диагностика
- подозрение на внелёгочную форму туберкулёза (в комплексной диагностике)
- неясные клинические случаи с затяжным лихорадочным или воспалительным синдромом
Принцип работы
Набор содержит пептидные фрагменты, соответствующие иммунодоминантным Т-клеточным (CD4+, CD8+) эпитопам микобактериальных белков ESAT-6 и CFP-10. У пациента берут по 1 мл крови в три вакуумные пробирки:
- Т-АНТИГЕН — литий-гепарин, разделительный гель и антигенный стимулятор
- ПКО — литий-гепарин, разделительный гель и фитогемагглютинин (положительный контроль стимуляции)
- ОКО — литий-гепарин и разделительный гель (отрицательный контроль стимуляции)
Если в крови есть антиген-специфические лимфоциты, они распознают стимулятор и выделяют ИФН-γ. Пробирки инкубируют 18–24 часа при +37±1 °C, затем центрифугируют для отделения плазмы. Концентрацию ИФН-γ определяют двухстадийным «сэндвич»-ИФА с биотин-стрептавидиновым усилением. Разница концентраций между пробирками «Т-АНТИГЕН» и «ОКО» (ΔИФН) отражает лимфоцитарный интерфероновый ответ на микобактериальные антигены.
Состав набора
| Компонент | Количество |
|---|---|
| Т-АНТИГЕН — пробирки вакуумные для забора 1 мл крови с литий-гепарином, разделительным гелем и антигенным стимулятором | 1 штатив, 50 шт. |
| ПКО — пробирки вакуумные для забора 1 мл крови с литий-гепарином, разделительным гелем и фитогемагглютинином | 1 штатив, 50 шт. |
| ОКО — пробирки вакуумные для забора 1 мл крови с литий-гепарином и разделительным гелем | 1 штатив, 50 шт. |
| Комплект реагентов для ИФА «ГАММА-ИНТЕРФЕРОН-ИФА» — 1 комплект | |
| Р1 Иммуносорбент | 2 планшета по 96 лунок |
| Р2 Контрольный образец (рекомбинантный ИФН-γ человека, лиофилизат) | 4 фл. |
| Р3 Раствор для разведения контрольного образца | 1 фл., 7,0 мл |
| Р4 Конъюгат №1 (биотинилированные моноклональные антитела к ИФН-γ) | 1 фл., 6,0 мл |
| Р5-1 Концентрат конъюгата №2, 11-кратный (стрептавидин, меченный пероксидазой хрена) | 1 фл., 2,5 мл |
| Р5-2 Раствор для разведения конъюгата №2 | 1 фл., 25 мл |
| Р6-1 Хромоген (3,3',5,5'-тетраметилбензидин) | 1 фл., 2,5 мл |
| Р6-2 Раствор для разведения хромогена (цитратный буфер с перекисью водорода) | 1 фл., 25 мл |
| Р7 Концентрат промывочного раствора, 25-кратный | 2 фл. по 50 мл |
| Р8 Стоп-реагент | 1 фл., 25,0 мл |
| Клейкая плёнка для заклеивания иммуносорбента | 8 шт. |
| Одноразовые ванночки для реагентов | 8 шт. |
| Одноразовые сменные наконечники к дозаторам (10–300 мкл) | 64 шт. |
| Инструкция по применению, паспорт | 1 + 1 шт. |
| Трафарет для построения графика | 2 шт. |
Технические характеристики
| Параметр | Значение |
|---|---|
| Метод | ИФА (двухстадийный «сэндвич» с биотин-стрептавидиновым усилением) |
| Аналит | интерферон-гамма (ИФН-γ) |
| Биоматериал | гепаринизированная цельная кровь / плазма |
| Объём крови | 3 мл (по 1 мл в 3 пробирки) |
| Время анализа | 20 ч 40 мин – 26 ч 40 мин |
| Инкубация | 18–24 ч при +37±1 °C, без оператора |
| Центрифугирование | 10 мин при 2800–3000 об/мин |
| ИФА-исследование | ≈2 ч 25 мин |
| Предел количественного определения | 3,125 пг/мл |
| Диагностическая чувствительность | 100% (ДИ 95%: 92,89–100%) |
| Диагностическая специфичность | 100% (ДИ 95%: 92,89–100%) |
| Аналитическая специфичность | 100% |
| Правильность (trueness) | отклонение ≤15% |
| Прецизионность (precision) | CV ≤15% |
| Срок годности | 12 мес. |
| Хранение ИФА-комплекта | +2…+8 °C |
| Хранение вакуумных пробирок | +2…+25 °C |
| Условия эксплуатации | +22±5 °C, влажность ≤80%, давление 84–106,7 кПа |
| Класс потенциального риска | 2б |
| Код ОКПД | 21.20.23.110 |
| Регистрационное удостоверение | № РЗН 2024/21946 от 31.01.2024 |
Интерпретация результатов
Основной показатель — ΔИФН, разница концентраций ИФН-γ между пробирками «Т-АНТИГЕН» и «ОКО», пг/мл.
| ΔИФН, пг/мл | ИФН-γ (ОКО), пг/мл | ОП (Т-АНТИГЕН) / ОП (ОКО) | ОП (ПКО), о.е. | Интерпретация |
|---|---|---|---|---|
| ≤ 8 | ≤ 100 | любой | ≥ 0,5 | Отрицательный, инфекция M. tuberculosis маловероятна |
| 8–9 | ≤ 100 | любой | ≥ 0,5 | «Серая зона», промежуточный результат — рекомендуется повторить анализ |
| ≥ 9 | ≤ 100 | ≥ 1,25 | любой | Положительный, инфекция M. tuberculosis вероятна |
| ≥ 9 | любой | < 1,25 | любой | Невалидный результат — рекомендуется повторить анализ |
| любой | > 100 | любой | любой | Невалидный результат — рекомендуется повторить анализ |
| ≤ 8 | любой | любой | < 0,5 | Невалидный результат — рекомендуется повторить анализ |
Важно: результат качественный — в отношении вероятности наличия или отсутствия инфекции M. tuberculosis. Величина интерферонового ответа не коррелирует с выраженностью инфекции, стадией туберкулёза или иным клиническим показателем.
Сравнение с другими методами диагностики
По данным сравнительных испытаний Московского областного клинического противотуберкулёзного диспансера (n=100).
| Тест | Невалидные / сомнительные | Чувствительность | Специфичность | Согласованность с диагнозом |
|---|---|---|---|---|
| ИГРА-ТБ | 1% | 80% (ДИ 64,3–95,7%) | 90% (ДИ 81,7–98,3%) | 83% (ДИ 75,6–90,4%) |
| Диаскинтест | 5% | 72% (ДИ 54,4–89,6%) | 90% (ДИ 81,7–98,3%) | 80% (ДИ 72,2–87,8%) |
| Манту | 22% | 72% (ДИ 54,4–89,6%) | 32% (ДИ 19,1–44,9%) | 53% (ДИ 43,2–62,8%) |
| T-SPOT.ТБ | 17% | 80% (ДИ 64,3–95,7%) | 50% (ДИ 36,1–63,9%) | 67% (ДИ 57,8–76,2%) |
| TB-Feron | 0% | 80% (ДИ 64,3–95,7%) | 88% (ДИ 79–97%) | 78% (ДИ 69,9–86,1%) |
| QFT Gold Plus | 0% | 80% (ДИ 64,3–95,7%) | 88% (ДИ 79–97%) | 80% (ДИ 72,2–87,8%) |
Среди шести методов иммунологической диагностики инфекции M. tuberculosis ИГРА-ТБ показал минимальную долю невалидных и сомнительных результатов и высокую согласованность с клиническим диагнозом.
Программное обеспечение «ИГРА»
Для автоматической обработки результатов доступно бесплатное ПО «ИГРА» v1.2.2. Программа:
- принимает данные оптической плотности с планшетного фотометра
- строит калибровочную кривую по контрольным образцам
- рассчитывает концентрацию ИФН-γ в исследуемых образцах
- автоматически интерпретирует результаты для набора «ИГРА-ТБ»
- формирует таблицу результатов и печатные заключения — поимённо и списком
- экспортирует данные в Excel и ЛИС (csv)
Системные требования: Windows 7–11 (32/64 бит), процессор от 1 ГГц, ОЗУ от 2 ГБ, HDD от 1 ГБ, разрешение экрана не менее 1024×768.
Важно: автоматическая интерпретация применима только к данным, полученным с набором «ИГРА-ТБ». Для других IGRA-наборов (QuantiFERON, TB-FERON и др.) возможна обработка без автоматической интерпретации.
Необходимое оборудование и материалы
- термостат суховоздушный 37±2 °C
- шейкер термостатируемый 37±2 °C, 700 об/мин
- вошер для планшетов
- планшетный фотометр двухволновой (450 нм и 620–700 нм)
- центрифуга настольная (1–3)×10³ об/мин
- дозаторы одноканальные 5–1000 мкл
- дозаторы многоканальные 10–300 мкл
- холодильник +2…+8 °C
- дистиллятор
- таймер
- иглы одноразовые к вакуумным системам и держатели
- пробирки типа «Эппендорф» 1,5–2,2 мл
- перчатки, халаты, защитные очки
- дезинфицирующие растворы
Образцы: забор, подготовка, хранение
- Кровь забирают из локтевой вены в три вакуумные пробирки «ИГРА-ТБ» по 1±0,2 мл в ходе одной пункции.
- Пробирки осторожно перемешивают 10 раз, переворачивая вверх дном — не трясти.
- Инкубируют при +37±1 °C в вертикальном положении 18–24 часа. До инкубации пробирки можно хранить до 16 часов при +22±5 °C, не охлаждая.
- После инкубации центрифугируют 10 мин при 2800–3000 об/мин для получения плазмы.
Плазму можно хранить 6 ч при +22±5 °C, 28 суток при +2…+8 °C или 1 год при −18…−20 °C (однократное размораживание). Образцы с выраженным гемолизом, гиперлипидемией или бактериальным проростом не используют.
Проведение ИФА — кратко
- Внести по 100 мкл контрольных образцов (200, 50, 12,5, 3,125 пг/мл и РРО) и исследуемых образцов плазмы в лунки иммуносорбента.
- Внести по 25 мкл конъюгата №1. Инкубировать 90 мин при +37±2 °C и встряхивании 700 об/мин. Промыть 5 раз.
- Внести по 100 мкл рабочего разведения конъюгата №2. Инкубировать 30 мин при +37±2 °C и встряхивании. Промыть 5 раз.
- Внести по 100 мкл индикаторного раствора. Выдержать 25 мин при +22±5 °C в защищённом от света месте.
- Внести по 100 мкл стоп-реагента.
- Измерить оптическую плотность при 450 нм относительно 620–700 нм.
Критерии валидности анализа: ОП нулевого контроля (РРО) — не выше 0,15 о.е.; ОП контрольного образца 200 пг/мл — не ниже 0,8 о.е.
Хранение, транспортировка, утилизация
- ИФА-комплект — +2…+8 °C в течение всего срока годности (12 мес.).
- Вакуумные пробирки — +2…+25 °C в течение всего срока годности. Допускается совместное хранение в холодильнике, но перед использованием пробирки прогревают при +22±5 °C не менее часа.
- Транспортирование — всеми видами крытого транспорта при температуре хранения; допускается +25 °C не более суток. Замораживание не допускается.
- После вскрытия — 3 мес. при +2…+8 °C для стрипов иммуносорбента, конъюгатов, РРО, стоп-реагента, хромогена и растворов для разведения. Восстановленный контрольный образец и его разведения хранению не подлежат.
- Приготовленный промывочный раствор — 15 дней при +22±5 °C или 30 дней при +2…+8 °C; рабочее разведение конъюгата №2 — не более 3 ч при +22±5 °C; индикаторный раствор хранению не подлежит.
Утилизация
- промывные растворы, неиспользованные концентрат промывочного раствора (Р7) и раствор для разведения хромогена (Р6-2) — отходы класса А
- твёрдые отходы, неиспользованные контрольные образцы, конъюгаты, растворы для разведения, иммуносорбент — отходы класса Б
- неиспользованный стоп-реагент — отходы класса Г
- утилизация — специализированными организациями, имеющими лицензию
Меры предосторожности
- Набор предназначен только для профессионального использования в клинико-диагностических лабораториях.
- С образцами крови работают как с потенциально инфекционно-опасным материалом.
- Обязательны средства индивидуальной защиты: перчатки, халат, защитные очки, респиратор.
- Не пипетировать растворы ртом. Запрещены приём пищи, курение и использование косметики в рабочих помещениях.
- Промывные растворы и твёрдые отходы обеззараживают и утилизируют по СанПиН 2.1.3684-21.
- Стоп-реагент содержит серную кислоту — избегать контакта с кожей и слизистыми.
- Набор не применяют при нарушении условий транспортирования и хранения, несоответствии внешнего вида реагентов, нарушении упаковки и по истечении срока годности.
- Противопоказаний и побочных эффектов при работе с набором не выявлено.
Документы
- Регистрационное удостоверение РЗН 2024/21946 с приложениемPDF, 513 КБ
- Инструкция по применению набора реагентов «ИГРА-ТБ»PDF, 432 КБ
- Брошюра «Тесты ИГРА-ТБ» · Е-ЛАБPDF, 1,5 МБ
- Руководство пользователя ПО «ИГРА» v1.2.2PDF, 1,5 МБ
Бесплатное ПО «ИГРА» для оценки результатов предоставляется по запросу — напишите менеджеру через форму «Запросить КП».